Gracias por visitar nature.com.Está utilizando una versión de navegador con soporte limitado para CSS.Para obtener la mejor experiencia, le recomendamos que utilice un navegador más actualizado (o desactive el modo de compatibilidad en Internet Explorer).Mientras tanto, para garantizar un soporte continuo, mostramos el sitio sin estilos ni JavaScript.Control deslizante con tres artículos mostrados por diapositiva.Use los botones Anterior y Siguiente para navegar por las diapositivas o los botones del controlador de diapositivas al final para navegar por cada diapositiva.Seiji P. Yamamoto, Daisuke Motooka, … Nobuhiro IritaniFranziska Geiselhardt, Martin Peters, … Andreas BeinekeQiaoxing Wu, Hongchao Wu, … Kegong TianHacène Medkour, Sergei Castaneda, … Oleg MediannikovWilliam Marciel de Souza, Marcílio Jorge Fumagalli, … Luiz Tadeu Moraes FigueiredoRomolo Nonno, Alba Marín-Moreno, … Jan PM LangeveldSebastián Giraldo-Ramírez, Santiago Rendón-Marín, … Julián Ruiz-SaenzTarka Raj Bhatta, Anthony Chamings, … Soren AlexandersenAnise N. Happi, Olusola A. Ogunsanya, … Christian T. HappiNature Communications volumen 14, Número de artículo: 624 (2023) Citar este artículoLa 'enfermedad asombrosa' es una enfermedad neurológica considerada una amenaza para los gatos domésticos europeos (Felis catus) durante casi cinco décadas.Sin embargo, su etiología ha permanecido oscura.Recientemente se ha demostrado que el virus Rustrela (RusV), un pariente del virus de la rubéola, está asociado con encefalitis en una amplia gama de huéspedes mamíferos.Aquí, informamos la detección de antígeno y ARN de RusV mediante secuenciación metagenómica, RT-qPCR, hibridación in situ e inmunohistoquímica en tejidos cerebrales de 27 de 29 gatos con meningoencefalomielitis no supurativa y signos clínicos compatibles con la "enfermedad asombrosa" de Suecia. , Austria y Alemania, pero no en gatos de control no afectados.El cribado de posibles huéspedes reservorio en Suecia reveló infección por RusV en ratones de madera (Apodemus sylvaticus).Nuestro trabajo indica que RusV es la causa largamente buscada de la "enfermedad asombrosa" felina.Dado su amplio espectro de huéspedes informado y su considerable rango geográfico, RusV puede ser el agente etiológico de neuropatologías en otros mamíferos, posiblemente incluso en humanos.En todas las especies de mamíferos, los trastornos inflamatorios del sistema nervioso central (SNC) están asociados con una morbilidad sustancial, mortalidad y déficits neurológicos a largo plazo.Desde el punto de vista etiopatogénico, pueden clasificarse en general en trastornos infecciosos e inmunomediados1.Sin embargo, con demasiada frecuencia, la causa de una encefalitis sigue siendo desconocida y deja a los médicos, pacientes y dueños de mascotas afectadas con una incertidumbre considerable sobre su origen, las opciones de tratamiento y, por lo tanto, el pronóstico.Esto último es particularmente cierto para el gran grupo histopatológicamente convergente de encefalitis linfohistiocíticas no supurativas.Una proporción sustancial de estos casos sigue sin resolverse utilizando métodos de diagnóstico convencionales, como técnicas de inmunohistoquímica (IHC), hibridación in situ (ISH) y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para patógenos neurotrópicos regionales2,3,4,5,6,7, 8,9.Una de esas controvertidas encefalitis de posible origen infeccioso es la denominada 'enfermedad del escalonamiento' de los gatos domésticos (Felis catus).Se describió por primera vez en la década de 1970 en la región sueca del lago Mälaren entre Estocolmo y Uppsala10, que sigue siendo un punto crítico de "enfermedad asombrosa" hasta el presente.En la década de 1990, también se describió la "enfermedad asombrosa" felina en una región cercana a Viena en Austria11,12.También se han descrito trastornos neurológicos similares a esta entidad patológica en gatos domésticos de otros países europeos6,13,14 e incluso en otros felinos15,16.El signo clínico más prototípico de la "enfermedad del tambaleo" es la ataxia de las patas traseras con un tono muscular generalmente aumentado que da como resultado una marcha tambaleante.Además, puede ocurrir una amplia gama de otros signos neurológicos, incluida la incapacidad para retraer las garras, hiperestesia y, en ocasiones, temblores y convulsiones.Las alteraciones del comportamiento incluyen mayor vocalización, depresión, volverse más afectivo y rara vez agresión10,12,17,18.La progresión de la enfermedad suele durar de unos pocos días a unas pocas semanas, pero también puede continuar durante más de un año y, por lo general, provoca un deterioro que requiere la eutanasia por razones de bienestar animal.La histopatología de la "enfermedad escalonada" se caracteriza por una meningoencefalomielitis predominantemente linfohistiocítica no supurativa con infiltración de células inmunitarias angiocéntricas y manguitos perivasculares predominantemente en la materia gris del SNC10,12,17,18,19.Debido a su presentación clínica típicamente típica, su histopatología uniforme y su aparición asociada geográficamente, siempre se ha sospechado que la 'enfermedad asombrosa' felina es una entidad de enfermedad cohesiva con una etiología consistente.Si bien el patrón microscópico ha sugerido un origen viral, su agente etiológico ha permanecido indeterminado durante casi cinco décadas.Durante mucho tiempo, el virus de la enfermedad de Borna 1 (BoDV-1; especie Orthobornavirus bornaense; familia Bornaviridae), que causa trastornos neurológicos en varios mamíferos, incluidos los humanos20,21,22, ha encabezado el panel de candidatos etiológicos19,23,24,25, 26,27,28.La enfermedad neurológica inducida por BoDV-1 en gatos domésticos se ha demostrado después de una infección experimental29, así como en un solo caso de infección natural confirmada en Suiza30.Sin embargo, las infecciones por BoDV-1 inequívocamente confirmadas en mamíferos domésticos se informan solo en áreas endémicas restringidas en Alemania, Austria, Suiza y Liechtenstein20,21,22,31,32, mientras que los resultados sugieren infecciones naturales por BoDV-1 en gatos con "enfermedad asombrosa". en Suecia no fue concluyente.En particular, no se pudo presentar una detección inequívoca y consistente de BoDV-1 con métodos de diagnóstico independientes.Además, las secuencias de BoDV-1 informadas desde Suecia no coincidían con el patrón filogeográfico, como se observó en individuos evidentemente infectados en las áreas endémicas conocidas de BoDV-1 y, por lo tanto, se sospecha que representan artefactos de laboratorio20,31,32.Afortunadamente, los avances en metagenómica clínica en los últimos años nos han brindado herramientas prometedoras para la detección de patógenos nuevos o inesperados involucrados en encefalitis hasta ahora inexplicables33,34,35,36,37,38.Uno de estos agentes encefalíticos recientemente descubiertos es el virus rustrela (RusV; Rubivirus strelense; Matonaviridae), un pariente del virus de la rubéola (RuV; Rubivirus rubellae), el agente causal de la rubéola en humanos37,39.RusV se identificó por primera vez en el cerebro de varios mamíferos en un zoológico cerca del Mar Báltico en el norte de Alemania37,40.Estos animales habían padecido trastornos neurológicos asociados con encefalitis linfohistiocítica37,38,40.Los ratones de campo de cuello amarillo (Apodemus flavicollis) sin encefalitis aparente fueron considerados posibles huéspedes reservorio del virus en esa zona37,40.Aquí, informamos la presencia de RusV en los cerebros de gatos con meningoencefalomielitis linfohistiocítica no supurativa y trastornos neurológicos que coinciden con la descripción de "enfermedad asombrosa" de Suecia, Austria y Alemania.El virus se detectó por primera vez mediante la aplicación de un flujo de trabajo metagenómico establecido41, que luego se confirmó mediante métodos independientes, incluidos RT-qPCR, ISH e IHC.Por el contrario, no se detectó RusV en los cerebros de gatos de control sin enfermedad neurológica o con encefalopatías de otras causas de la misma región geográfica o de regiones cercanas.Por lo tanto, nuestra investigación sobre casos recientes e históricos, que datan de la década de 1990, proporciona evidencia de que RusV ha sido el agente causante de la "enfermedad asombrosa" felina conocida desde hace mucho tiempo.En un intento de investigar la etiología de la "enfermedad asombrosa", reunimos muestras de cerebro congeladas o fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE) de 29 gatos con meningoencefalomielitis linfohistiocítica multifocal y una presentación clínica consistente con la descripción de "enfermedad asombrosa", particularmente ataxia y otras alteraciones de la marcha.La mayoría de los gatos procedían de los puntos críticos previamente identificados de "enfermedad asombrosa" en Suecia (n = 15) y Austria (n = 9) y habían sido diagnosticados por veterinarios con experiencia en la fenomenología de "enfermedad asombrosa".Cinco casos adicionales que coincidían con los mismos criterios de inclusión se originaron en diferentes regiones de Alemania.Los tejidos cerebrales de estos 29 gatos se examinaron para detectar la presencia de bornavirus mediante ensayos de RT-qPCR que detectan el ARN de BoDV-1 y otros ortobornavirus34 (Tabla complementaria 1), y mediante IHC usando un anticuerpo monoclonal dirigido a la nucleoproteína BoDV-1 (Figura complementaria . 1).No se detectaron ni ARN de bornavirus ni antígeno.Las muestras seleccionadas se analizaron posteriormente utilizando un flujo de trabajo de secuenciación metagenómica genérica41.En un análisis inicial con blastx, se identificaron lecturas de secuencia con la mayor identidad con RusV en 15 de las 17 muestras analizadas de estos tres países (Tabla 1).La secuenciación adicional de alto rendimiento (HTS), asistida por el enriquecimiento de objetivos utilizando los conjuntos panRubi myBaits v2 y v3, dio como resultado secuencias completas del genoma de RusV para tres gatos de Suecia (animales SWE_13, SWE_14 y SWE_15) y un gato del noreste de Alemania (GER_04) , así como una secuencia completa y casi completa del genoma de dos gatos de Austria (AUT_02 y AUT_06, respectivamente).Las secuencias de RusV recién identificadas se agruparon claramente con otras secuencias de RusV en comparación con los matonavirus relacionados (Fig. 1a), según las secuencias de aminoácidos (aa) de la poliproteína estructural (p110/sPP).Las secuencias de nucleótidos (nt) del genoma de Austria y Suecia formaron linajes filogenéticos separados en comparación con las secuencias de Alemania (Fig. 1b).Mientras que la secuencia GER_04 poseía al menos un 92,1 % de identidad de secuencia de nt con las secuencias alemanas RusV publicadas anteriormente, las identidades mínimas de nt de las secuencias sueca y austriaca con las secuencias alemanas eran solo del 76,7 % y el 76,0 %, respectivamente, pero del 80,7 % entre sí ( Figura complementaria 2).La organización del genoma de las secuencias de RusV recién descubiertas (Fig. 1c) fue consistente con las de los genomas de RusV publicados previamente37,40.Usando un análisis de ventana deslizante, identificamos una región altamente conservada en el extremo 5 'de los genomas de RusV (posiciones aproximadas 1 a 300).Las regiones de variabilidad particularmente alta cubrieron la región intergénica entre los marcos de lectura abiertos (ORF) de p200 y p110, así como un tramo de la secuencia de codificación de p150 alrededor de las posiciones nt 2100–2600 (Fig. 1c).a Se alinearon las secuencias de aminoácidos de la poliproteína estructural (p110/sPP) de todos los matonavirus conocidos y se calculó un árbol filogenético de máxima verosimilitud (ML) (IQ-TREE2 versión 2.2.0; FLU + F + I + G4; 100.000 arranque ultrarrápido).Los valores de soporte de Bootstrap se muestran en cursiva.b Árbol ML de secuencias completas o casi completas del genoma de RusV de gatos con "enfermedad asombrosa" y todas las secuencias de RusV disponibles públicamente (IQ-TREE2 versión 2.2.0; TIM3 + F + I; 100 000 arranques ultrarrápidos).Las secuencias de Suecia, Austria y Alemania están resaltadas en azul, verde y naranja, respectivamente.Las secuencias de un grupo RusV alemán previamente identificado de animales de zoológico con encefalitis y ratones de campo de cuello amarillo aparentemente sanos (Apodemus flavicollis)37,38,40 se presentan en un cuadro discontinuo.Los valores de soporte de Bootstrap se muestran en los nodos.c La variabilidad genética de los linajes RusV de Suecia, Austria y Alemania se presenta como la distancia media JC69 por pares utilizando un análisis de ventana deslizante (ventana: 200 nt; tamaño de paso: 50 nt).Se muestra la organización genómica de RusV, destacando los marcos de lectura abiertos de poliproteína no estructural (p200/nsPP) y estructural (p110/sPP), así como los productos de escisión maduros proteasa (p150), ARN polimerasa dirigida por ARN (p90) , proteína de la cápside (C) y glicoproteínas E2 y E1.Dado que el ensayo de RT-qPCR RusV Mix-137 publicado inicialmente no pudo detectar el ARN de RusV en muestras de Suecia y Austria (datos no mostrados), diseñamos un nuevo conjunto de cebadores y sondas dirigidos a la región altamente conservada en el extremo 5 'de el genoma (Fig. 3 complementaria; Tabla 1 complementaria).Este ensayo panRusV recientemente establecido detectó fácilmente el ARN de RusV en los cerebros de los 15 gatos suecos con "enfermedad asombrosa", ocho de nueve gatos austriacos11,12 y tres de cinco gatos de Alemania (Tabla 1).Los resultados fueron moderadamente positivos para el tejido congelado (ciclo de cuantificación [Cq] valores de 20 a 32) y bastante débiles para los animales de los que solo se disponía de material FFPE (Cq 27 a 36; Fig. 2; Fig. 4a complementaria) .Por el contrario, no se detectó ARN de RusV en muestras de cerebro congeladas de 21 gatos de control sin encefalitis originarios de Suecia, Austria y Alemania, o en ocho gatos de Alemania que padecían otros tipos de encefalitis (Tabla 1; Tabla complementaria 4).Los gatos con signos clínicos y lesiones histopatológicas consistentes con los criterios de "enfermedad escalonada" fueron evaluados por diferentes métodos de diagnóstico independientes.Los gatos se consideraron positivos para RusV si se detectaba ARN y/o antígeno de RusV mediante al menos dos de los métodos aplicados (RT-qPCR, ISH, IHC, secuenciación por HTS).Los gatos con un resultado positivo en un solo ensayo se consideraron inciertos.El verde indica un resultado positivo general de un individuo, mientras que el azul indica positividad para la detección de ARN o antígeno de RusV en una prueba individual.La intensidad del color refleja semicuantitativamente la fuerza de la señal del ensayo respectivo.La puntuación de las señales IHC y RNAscope ISH se describe en la Tabla 2. Sistema nervioso central del SNC, FFPE fijado en formalina e incluido en parafina, secuenciación HTS de alto rendimiento seguida de análisis metagenómico, ciclo de cuantificación Cq, hibridación in situ ISH usando RNAscope, IHC inmunohistoquímica, pos positivo, neg negativo, nd no determinado.Para confirmar y caracterizar aún más la infección por RusV en los gatos, empleamos la detección de ARN viral por ISH y la detección de antígenos por IHC (Fig. 3).Se diseñó una sonda ISH de RNAscope para apuntar al tramo altamente conservado en el extremo 5 'del genoma de RusV (Fig. 3 complementaria).Se observó una señal específica de ISH en 24 de los 29 gatos evaluados de los tres países (Tabla 1; Fig. 3a–d).Dos animales revelaron resultados no concluyentes y dos fueron ISH-negativos (Fig. 2).El ARN de RusV se detectó mediante hibridación in situ con RNAscope (a–d), mientras que la proteína de la cápside de RusV se detectó mediante inmunohistoquímica (e–h).Detección de ARN del virus rustrela (RusV) por hibridación in situ RNAscope (a–d) y antígeno RusV por inmunohistoquímica (e–h) en el sistema nervioso central de gatos encefalíticos.Tanto el ARN del virus como la proteína de la cápside se ubicaron principalmente en el citoplasma de diferentes poblaciones de células nerviosas.Son típicos los productos de reacción esféricos, que pueden coalescer en una señal más extensa y/o difusa.Las neuronas con la carga viral más alta fueron particularmente las células de Purkinje (a, e: PC), las células granulares de la circunvolución dentada (b, f: GLD), las células piramidales en las cortezas cerebrales, incluida la neocorteza (c, g: Py).Además, se observan numerosas células positivas para RusV en las neuronas del asta ventral del tronco encefálico inferior y de la médula espinal (d, h: VHN).GLC: capa de células granulares de la corteza cerebelosa;GLD: capa de células granulares de la circunvolución dentada;NCR: cinta neocortical;CP: célula de Purkinje;Py: célula piramidal;VHN: neurona del asta ventral.Gatos: a, e SWE_03;b, f SWE_11;c, g SWE_05;d, h AUT_09.Se presentan imágenes representativas de gatos infectados con RusV.Se analizaron todos los gatos de casos y controles (n = 29 cada uno).Los resultados de los análisis IHC e ISH se presentan en la Tabla 1 y la Fig. 2.Además, realizamos IHC utilizando un anticuerpo monoclonal de ratón recién generado dirigido a la proteína de la cápside RusV.Se observó inmunotinción específica que refleja el patrón ISH (Fig. 3e-h) en 27 de los 29 gatos analizados con "enfermedad asombrosa", pero no en ningún cerebro de los 18 gatos de control evaluados (Tabla 1).IHC identificó el antígeno RusV en dos casos que habían sido negativos por RT-qPCR de tejido cerebral FFPE (AUT_03 y GER_02), mientras que un individuo con RT-qPCR positivo (AUT_05) permaneció negativo por IHC (Fig. 2).Tanto por ISH como por IHC, se observó una señal cromógena intracelular difusa a granular específica predominantemente en el pericario de las neuronas piramidales de las cortezas cerebrales, a saber, de la neocorteza, la corteza cingulada/parahipocampal (Fig. 3c, g) y el hipocampo propiamente dicho (Fig. 3f ), en los cuerpos celulares de las células granulares de la circunvolución dentada (Fig. 3b), las células de Purkinje del cerebelo (Fig. 3a, e), las neuronas multipolares del tronco encefálico y el techo del cerebelo, y en las neuronas del asta ventral de la médula espinal (Fig. 3d, h).En ocasiones, también se observó inmunorreactividad citoplasmática en células neurogliales y microgliales interpuestas individuales.Además, se detectaron algunas pequeñas reacciones en forma de puntos en un patrón disperso entre el neuropilo y la sustancia blanca.Para confirmar la especificidad de estos hallazgos, IHC analizó el tejido cerebral de los 29 gatos de control y ISH analizó los cerebros de 17 gatos de control que representaban a los tres países.En estos animales no se detectaron antígeno viral ni ARN de RusV (Tabla 1).Entre los 29 gatos de este estudio que cumplían los criterios de "enfermedad escalonada", 27 gatos fueron identificados como RusV positivos por al menos dos de los métodos empleados (Tabla 1; Fig. 2).Veintiún (77,8%) de ellos eran machos castrados o intactos (Tabla complementaria 2), lo que es consistente con estudios previos sobre la "enfermedad escalonada"17,18,42.Todos los animales afectados eran adultos, con una mediana de edad de 3,2 años (rango de 1,5 a 12,3; figura complementaria 5a; tabla complementaria 2), y todos tenían acceso al exterior (cuando se informó) (tabla complementaria 2).La aparición de la enfermedad había ocurrido con mayor frecuencia en invierno y primavera (diciembre a mayo: 18 casos) en comparación con el verano y el otoño (junio a noviembre: 7 casos; Fig. 5b complementaria; Tabla 2 complementaria).Los signos clínicos típicamente observados incluían anomalías de la marcha que se deterioraban gradualmente, con postura anormal, marcha rígida, ataxia, debilidad predominante en las extremidades traseras, que progresaba a tetraparesia no ambulatoria y déficits propioceptivos.Además, en algunos de los pacientes se notificó fiebre, cambios de comportamiento como vocalización anormal o comportamiento afectivo, depresión, hiperestesia en la región dorsal de la espalda y lumbar/cola, reflejos espinales reducidos y reacciones posturales, signos de disfunción de los nervios craneales e incapacidad para retraer las garras. casos.En un animal, las convulsiones generalizadas se registraron específicamente (Tabla complementaria 3).La duración desde el inicio de la enfermedad informada hasta la eutanasia varió de dos días a más de un año, y la mayoría de los gatos fueron sacrificados en menos de dos meses (mediana de dos semanas) (Figuras complementarias 5c, d; Tabla complementaria 2).En congruencia con informes previos sobre la "enfermedad escalonada" felina11,12,18, el examen histológico del cerebro y la médula espinal reveló infiltrados linfocíticos y/o linfohistiocíticos angiocéntricos y/o linfohistiocíticos generalizados con predominio de poliomielitis en todos los casos (Figs. 4 y 5; Tabla complementaria 3 ).En ocasiones se acompañaban de astrogliosis oligofocal y proliferación microglial, algunas neuronas en degeneración y nódulos neuronofágicos (fig. 5).La inflamación del parénquima fue más pronunciada en el tronco encefálico (Figs. 4a, 5b, c), las cortezas cerebrales (Fig. 4b, c) y todos los niveles de la médula espinal, mientras que fue menos evidente en el cerebelo a pesar de la detección a menudo prominente de ARN viral y antígeno (Fig. 4a).El predominio de la inflamación en la materia gris se confirmó mediante la tinción Luxol Fast Blue-Cresyl Echt Violet para gatos infectados con RusV seleccionados (Fig. 6 complementaria).Además, también había infiltrados linfohistiocíticos y menos células plasmáticas en las leptomeninges, incluidas las del cerebelo (Fig. 4a).En particular, se observaron señales de antígeno y ARN viral más allá de las áreas afectadas por cambios inflamatorios (Fig. 3f) y, ocasionalmente, también se observaron cambios inflamatorios en áreas con señales de antígeno y ARN viral en las inmediaciones.En todas las regiones, no se observaron cuerpos de inclusión.La histología generalmente presenta manguitos linfohistiocíticos perivasculares con predominio de poliomielitis (a–c: recuadros sólidos) e infiltrados angiocéntricos (a–c: recuadros discontinuos).Son más prominentes en el tronco encefálico (a: Po), la formación del hipocampo (b) y la neocorteza (c).Los infiltrados leptomeníngeos (a: punta de flecha blanca) también ocurren en áreas con escasa infiltración parenquimatosa como el cerebelo (a: Cer).Coloración: hematoxilina eosina (HE).Puntos de referencia anatómicos: Cer: cerebelo;CWM: sustancia blanca cerebelosa;GLC: capa de células granulares de la corteza cerebelosa;GLD: capa de células granulares de la circunvolución dentada;NCR: cinta neocortical;PL: capa de células piramidales;Po: protuberancia;VIV: cuarto ventrículo;VL: ventrículo lateral.Gatos: un SWE_04;b, c SWE_07.Se presentan imágenes representativas de gatos infectados con RusV.Se analizaron todos los gatos de casos y controles (n = 29 cada uno).Los diagnósticos histopatológicos se proporcionan en las Tablas complementarias 3 y 4.Los cerebros infectados muestran neuronas (a–c: puntas de flecha) con (c: punta de flecha roja) y sin (a, b: puntas de flecha amarilla y naranja) características degenerativas, tempranas (a, b: puntas de flecha amarilla y naranja) y avanzadas (c: puntas de flecha roja punta de flecha) neuronofagia sugestiva de un patógeno neuronotrópico.La deserción focal de las neuronas se acompaña de estrellas microgliales (c: marco).Los infiltrados inflamatorios (b, c: asteriscos) se mezclan con proliferaciones gliales focales.Los axones distróficos (c: flechas negras) están ocasionalmente presentes dentro del área perilesional.Coloración: hematoxilina eosina (HE).Puntos de referencia anatómicos: NCR: cinta neocortical;RF: formación reticular.Gatos: un SWE_06;b, c SWE_04.Se presentan imágenes representativas de gatos infectados con RusV.Se analizaron todos los gatos de casos y controles (n = 29 cada uno).Los diagnósticos histopatológicos se proporcionan en las Tablas complementarias 3 y 4.Además, analizamos muestras de cerebro de 116 roedores que se recolectaron entre 1995 y 2019 durante estudios de monitoreo cerca de Grimsö en el condado de Örebro (Figura complementaria 6), que se encuentra aproximadamente a 80 km al suroeste del origen del gato infectado con RusV más cercano detectado en este estudio (Fig. 6).PanRusV RT-qPCR detectó ARN de RusV en ocho de 106 (7,5%) ratones de madera (sinónimo 'ratones de campo de cola larga'; Apodemus sylvaticus) con valores de Cq que oscilan entre 20 y 35 (Fig. 4b complementaria).Por el contrario, no detectamos ARN de RusV en diez ratones de campo de cuello amarillo de la misma ubicación.Los individuos positivos fueron recolectados en los años 1996 (n = 2), 1997 (n = 3), 2005 (n = 2) y 2011 (n = 1).Todos los animales positivos habían sido atrapados durante la temporada de otoño, lo que es consistente con el número considerablemente mayor de ratones de madera atrapados durante el otoño (n = 94) en comparación con la primavera (n = 12; Fig. 7 complementaria).un árbol filogenético de máxima verosimilitud (ML) de secuencias parciales de RusV (409 nucleótidos, que representan las posiciones del genoma 100 a 508 del genoma de referencia de RusV derivado de burro MN552442.2; IQ-TREE versión 2.2.0; TN + F + G4; 100 000 ultrarrápidos arranques).Solo los valores de arranque ≥70 en las ramas principales se muestran en el árbol filogenético.Los nombres de las secuencias de RusV se muestran en el formato "anfitrión/código de ubicación ISO 1366 (estado federal.país)/identificación del animal/año".b, c Mapeo del origen geográfico de animales RusV positivos en Europa (b) y en la región del lago Mälaren en Suecia (c).Los colores representan los clados filogenéticos de las secuencias (a).Los gatos positivos para RusV que no pudieron entregar secuencias se representan en negro.Los respectivos animales huéspedes se muestran como círculos (gatos), cuadrados (Apodemus spp.) y triángulos (animales de zoológico).Los símbolos en recuadros grises representan personas de la misma ubicación o de ubicaciones muy cercanas.AUT Austria, DEU/GER Alemania, SWE Suecia, BE Berlín, MV Mecklemburgo-Pomerania Occidental, NI Baja Sajonia.Ninguno de los animales positivos mostró lesiones inflamatorias en sus tejidos cerebrales.La calidad de la muestra permitió el análisis ISH del tejido cerebral para solo cuatro individuos positivos para RusV.Todos ellos exhibieron una señal específica, mientras que un ratón de madera negativo para RT-qPCR no lo hizo cuando se probó en paralelo (Fig. 8 complementaria).Para permitir un análisis filogenético detallado, nuestro objetivo fue generar información de secuencia de RusV para todos los gatos y ratones de madera positivos.Sin embargo, la secuenciación del genoma completo de RusV por HTS es sofisticada y laboriosa40.Particularmente para aquellas personas que solo tenían material FFPE disponible, las secuencias generadas estaban muy fragmentadas.Por lo tanto, diseñamos cebadores dirigidos específicamente a un tramo de 409 nt dentro de la región altamente conservada en el extremo 5 'del genoma que se aplicará para la RT-PCR convencional y la posterior secuenciación de Sanger (Tabla complementaria 1; Figura complementaria 3).Usando este enfoque, se generó suficiente información de secuencia para 23 gatos positivos para RusV y los ocho ratones de madera positivos para RusV.El análisis filogenético de estas secuencias junto con todas las secuencias de RusV publicadas previamente reveló tres clados claramente distinguibles para las secuencias que se originaron en Suecia, Austria o el noreste de Alemania, con los clados sueco y austriaco más estrechamente relacionados entre sí que con el clado del noreste de Alemania (Fig. 6a).El clado sueco reveló tres subclados distinguibles.Un subclado albergaba secuencias de diez gatos de un área de unos 9000 km² alrededor de la ciudad de Uppsala.Un segundo subclade incluía tres secuencias de RusV de gatos de la misma región y todas las secuencias de ratones de madera de Grimsö.El tercer subclade estaba constituido por una sola secuencia de un gato de Estocolmo (Fig. 6a, c).Las secuencias de ambos gatos del noreste de Alemania pertenecían al clado del noreste de Alemania publicado previamente (Fig. 6a, b)37,40.Sorprendentemente, los fragmentos de secuencia disponibles para cat GER_01, que se originaron en Hannover en Alemania Central, estaban más estrechamente relacionados con las secuencias del clado austriaco que con el clado del noreste de Alemania (Fig. 6a, b).Este gato había sido importado de China aproximadamente un año antes del inicio de la enfermedad, pero nunca había estado en Austria6.Durante casi cinco décadas, se había sospechado que la "enfermedad asombrosa" en los gatos domésticos era una entidad cohesiva que producía signos clínicos y patrones histopatológicos bastante consistentes que indicaban una etiología uniforme, presumiblemente viral, pero aún desconocida10,11,12,17,18.Si bien BoDV-1 se había discutido como candidato para causar la "enfermedad asombrosa" felina19,24,26,27,28, no se pudieron presentar pruebas de infecciones naturales que cumplieran con los estándares de diagnóstico actuales20,31,32.Aquí utilizamos enfoques de diagnóstico sólidos que habían demostrado detectar con éxito una amplia gama de ortobornavirus43, incluidos casos de encefalitis inducida por BoDV-1 en humanos y mamíferos domésticos21,22,34.Sin embargo, no pudimos detectar el ARN de bornavirus o la nucleoproteína BoDV-1 en ninguno de los 29 gatos analizados de tres países diferentes con características clinicopatológicas consistentes con una "enfermedad asombrosa".Por lo tanto, nuestros resultados refutan la hipótesis de que BoDV-1 sea el agente causante de la "enfermedad asombrosa".En cambio, pudimos confirmar inequívocamente la infección por RusV en 27 de estos 29 gatos.Detectamos constantemente el antígeno y el ARN de RusV mediante el empleo de ensayos de diagnóstico independientes, que incluyen RT-qPCR, secuenciación del genoma, ISH e IHC en la mayoría de estos individuos.Solo ocurrieron inconsistencias menores entre los resultados de los ensayos, posiblemente debido a la variabilidad genética de las variantes de RusV involucradas, la calidad del material disponible y las sensibilidades diferenciales de los ensayos empleados que pueden haber llevado a resultados falsos negativos de pruebas individuales, particularmente para individuos para los cuales solo estaba disponible el material FFPE archivado.La infección experimental de gatos con RusV, para reproducir la enfermedad y así cumplir con los postulados de Henle-Koch, no se ha realizado hasta el momento debido a la falta de un aislado del virus.Sin embargo, demostramos una sorprendente asociación entre la infección y la enfermedad, con casi todos los animales del grupo de "enfermedad asombrosa" que son positivos para RusV, mientras que el virus no se detectó en ningún gato de control sin enfermedad neurológica o con otros tipos de encefalitis.Además, el curso clínico y las lesiones histológicas observadas en gatos clasificados como "enfermedad asombrosa" en este y en estudios anteriores10,12,17,18 se parecían mucho a las descritas para otros mamíferos infectados por RusV en Alemania37,40.Por lo tanto, RusV debe considerarse como el agente causante de la "enfermedad del escalonamiento", lo que confirma la suposición anterior de que la "enfermedad del escalonamiento" felino es una entidad de enfermedad cohesiva y unicausal en lugar de un síndrome heterogéneo11,18.Siempre que los estudios futuros confirmen aún más nuestros hallazgos, sugerimos que los criterios para el diagnóstico de "enfermedad escalonada", que hasta ahora se basan en los hallazgos histológicos típicos en combinación con una presentación clínica consistente11,18, deben modificarse por la detección de una infección RusV.Dado que ni los signos clínicos ni las lesiones histopatológicas de la "enfermedad escalonada" son patognomónicos, se puede encontrar que los trastornos que se asemejan a la "enfermedad escalonada" no están relacionados con RusV, como se demostró para el animal GER_03 en este estudio.BoDV-1 es un agente causal potencial de la encefalitis no supurativa de gatos domésticos en regiones donde este virus es endémico (partes de Alemania, Austria, Suiza y el Principado de Liechtenstein), pero hasta ahora no se ha detectado en Suecia o en el área de Viena en el Este de Austria20,21,22,31,32,44.Además, se describió que las lesiones inflamatorias en el SNC de gatos infectados experimentalmente con BoDV-1 predominan en la sustancia blanca y, por lo tanto, difieren de la descripción de "enfermedad asombrosa"29.En congruencia con las observaciones de animales de zoológico infectados con RusV37,40, el ARN y el antígeno de RusV en gatos infectados se detectaron predominantemente en las neuronas de la corteza cerebral, el hipocampo, el cerebelo, el tronco encefálico y la médula espinal.En particular, la infección también afectó con frecuencia a la corteza cerebelosa y los núcleos del techo del cerebelo que contribuyen esencialmente a la coordinación extrapiramidal de los patrones de marcha y movimiento45.Las lesiones histológicas también fueron más prominentes en la sustancia gris, en particular en el tronco encefálico, la corteza cerebral y la médula espinal, lo que es consistente con los hallazgos previos en gatos con "enfermedad asombrosa"12,18, así como en mamíferos infectados con RusV37,40.Los cambios neuropatógenos incluyeron degeneración neuronal, astrogliosis perineuronal, proliferación microglial y neuronofagia, pero también provocaron cambios inflamatorios focales y distantes caracterizados predominantemente por infiltrados linfocíticos y/o linfohistiocíticos angiocéntricos.Al igual que con otras encefalitis virales, como la rabia o la enfermedad de Borna, las lesiones inflamatorias más prominentes no siempre se encontraron en las áreas con mayor número de células positivas para ARN y antígeno de RusV46,47.Tras la destrucción de células y tejidos, se supone que la convección de antígenos a través del sistema glifático en particular desencadena manguitos perivasculares a lo largo de la ruta de drenaje extracelular de los espacios de Robin-Virchow y el compartimento subaracnoideo48.Además, el ARN viral y el antígeno pueden incluso ser apenas detectables en el parénquima cerebral en el momento de la investigación debido a la eliminación del virus, como se documenta en la encefalomielitis asociada a flavivirus49,50.Detectamos la infección por RusV de gatos en la región del lago Mälaren en Suecia y el noreste de Viena en Austria, dos focos tradicionales de 'enfermedad asombrosa'10,11,12,18,42, así como en el norte de Alemania, donde RusV había estado inicialmente descubierto37,40, pero la "enfermedad asombrosa" aún no se había informado.Los datos de origen se proporcionan con este documento.Veterinario.rec.J.Comp.Patol.J. Felino Med.CirugíaVeterinario.Parasitol.registroSemental.Frente.Veterinario.cienciaclin.Infectar.Dis.J. Vet.Interno.Medicina.Frente.Veterinario.cienciaMedicina.J. Clin.Microbiol.Tierärztl.Veterinario.Patol.Medicina.J. Clin.Microbiol.Wochenschr.EUR.PracticaJ.Comp.Patol.Acta Neuropathol.Patog de PLoS.Lanceta Infectada.Dis.Transfronterizo.emergenteDis.Acta Vet.Escanear.J. Gen. Virol.J. Felino Med.CirugíaSuplemento APMISJ. Felino Med.CirugíaVeterinario.Acta Neuropathol.EUR.J. Vet.Patol.Rev.Med.Virol.Los microbios infectan.Hoffmann, B. et al.N. ingl.J.Med.N. ingl.J.Med.emergenteInfectar.Dis.Transfronterizo.emergenteDis.Espectro de Microbiol.cienciaVeterinario.rec.J. Gen. Virol.FarmaciaEl r.Veterinario.inmunol.inmunopatol.Soy.J. Vet.Res.Auton.Neurosci.J. Neuropathol.Exp.Neurol.J. Vet.DiagnósticoInvertir.Infectar.Gineta.Evol.emergenteInfectar.Dis.J.Virol.Schmieder, R. & Edwards, R. 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Virol.Financiamiento de acceso abierto habilitado y organizado por Projekt DEAL.Los autores declaran no tener conflictos de intereses.Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en una línea de crédito al material.Si el material no está incluido en la licencia Creative Commons del artículo y su uso previsto no está permitido por la regulación legal o excede el uso permitido, deberá obtener el permiso directamente del titular de los derechos de autor.Cualquier persona con la que compartas el siguiente enlace podrá leer este contenido:Lo sentimos, un enlace para compartir no está disponible actualmente para este artículo.Proporcionado por la iniciativa de intercambio de contenido Springer Nature SharedItAl enviar un comentario, acepta cumplir con nuestros Términos y Pautas de la comunidad.Si encuentra algo abusivo o que no cumple con nuestros términos o pautas, márquelo como inapropiado.